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q225
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q225MX
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PCR效率低
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PCR效率低(例如效率 <80%),
可能原因是
聚合酶反应不完全:在保证阴性对照情况下,适当降低退火温度,提高延伸温度并延长时间,或加入更多聚合酶
解链温度不合适:一般cDNA/cfDNA在90-96C,gDNA在95-99C。如果扩增子中GC过高(>70%),可适量提高温度,加入betaine、DMSO或甘油
样品中存在抑制剂:重新提纯样品或用螯合、吸附等方法去除抑制剂
引物/探针设计不当:重新设计引物或探针
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