PCR效率低(例如效率 <80%)，可能原因是
 
聚合酶反应不完全：在保证阴性对照情况下，适当降低退火温度，提高延伸温度并延长时间，或加入更多聚合酶
 
解链温度不合适：一般cDNA/cfDNA在90-96C，gDNA在95-99C。如果扩增子中GC过高(>70%)，可适量提高温度，加入betaine、DMSO或甘油
 
样品中存在抑制剂：重新提纯样品或用螯合、吸附等方法去除抑制剂
 
引物/探针设计不当：重新设计引物或探针